Analitik sürecin başarısı, kullanılan numunenin kalitesine doğrudan bağlıdır. DNA ve RNA izolasyonu, karmaşık biyolojik matrislerden nükleik asitlerin saflaştırılarak ayrılması işlemidir.
DNA İzolasyonu ve Analiz Yöntemleri
DNA izolasyonu; hücrenin parçalanması (lizis), proteinlerin ve lipidlerin uzaklaştırılması ve son olarak DNA’nın çöktürülmesi aşamalarından oluşur. Akademik düzeyde DNA’nın saflığı ($A_{260}/A_{280}$ oranı) analizin güvenilirliği için kritiktir.
RNA İzolasyonu ve Analiz Yöntemleri
RNA, yapısı gereği DNA’dan çok daha hassastır. RNase enzimlerinin yıkıcı etkisinden korunmak için soğuk zincir ve özel inhibitörler kullanılır. RNA izolasyonu, gen ifadesi (gene expression) çalışmalarının ilk ve en hassas adımıdır.
Kalite Kontrol: Agaroz Jel Elektroforezi ve Image J
İzolasyon sonrası nükleik asitlerin bütünlüğü Agaroz Jel Elektroforezi ile kontrol edilir. DNA veya RNA parçalarının büyüklüklerine göre elektrik alan altında yürümesi sağlanır. Elde edilen bant görüntüleri, Image J programı gibi dijital analiz araçlarıyla yoğunluk bakımından incelenerek miktar tayini ve kalite onayı yapılır.
2. Genetik Kopyalamanın Mühendisliği: PCR ve cDNA Sentezi
İzole edilen nükleik asitler, hedef bölgenin çoğaltılması için PCR işlemine tabi tutulur.
cDNA Sentezi: RNA doğrudan PCR yapılamayacağı için, Reverse Transcriptase enzimi kullanılarak RNA'dan komplementer DNA (cDNA) sentezlenir. Bu süreç, hücredeki aktif genlerin anlık bir "fotoğrafını" çekmek gibidir.
PCR Reaksiyonu Hazırlanması: $MgCl_2$, dNTP'ler, primerler ve Taq Polimerazın hassas oranlarla bir araya getirilmesi (Master Mix) işlemin başarısını belirler.
Sonuçların Analizi: PCR ürünleri tekrar elektroforeze tabi tutularak hedeflenen bandın oluşup oluşmadığı ve spesifikliği yorumlanır.
3. İleri Düzey Analiz: Real-Time PCR (qPCR)
Geleneksel PCR sadece "varlık-yokluk" bilgisi verirken, Real-Time PCR reaksiyonun her anını izlememize olanak tanır.
Kalitatif ve Kantitatif Analiz: qPCR ile bir örnekteki hedef genin kaç kopya olduğu veya kontrol grubuna göre kaç kat arttığı (bağıl kantitasyon) hesaplanabilir.
Cihaz Kullanımı ve Veri Yorumlama: Floresan sinyallerin eşik değerini ($C_t$ değeri) geçtiği an, genetik yükün bir göstergesidir. Doğru bir amplifikasyon eğrisi ve erime eğrisi (melting curve) analizi, primer dimerleri ve özgül olmayan bağlanmaları ayırt etmek için elzemdir.
Neden Uygulamalı Eğitim Almalısınız?
Moleküler teknikler kitaplardan okunarak değil, pipet tutarak ve cihaz başında hata yaparak öğrenilir. Bir PCR reaksiyonundaki 1 microlitrelik hata, tüm deneyi geçersiz kılabilir. Bu nedenle teorik bilginin pratikle taçlandırılması kariyeriniz için hayati önem taşır.
Lab Akademi Deneyim ve Eğitim Merkezi Farkı
Bu karmaşık süreçleri kağıt üzerinde bırakmıyor, sizi laboratuvara davet ediyoruz! Lab Akademi, Türkiye'nin laboratuvar becerilerine odaklanmış en kapsamlı eğitim merkezidir.
Bu Eğitimde Sizi Neler Bekliyor?
Teorik Temel: 4 saatlik derinlemesine online ön hazırlık.
Yoğun Pratik: 8 saat boyunca bizzat DNA/RNA izole edecek, PCR kuracak ve qPCR cihazını kullanacaksınız.
Sektörel Yetkinlik: İş dünyasında en çok aranan "cihaz kullanabilme ve metot geliştirme" becerisini CV'nize ekleyeceksiniz.
Siz de kariyerinizde fark yaratmak, moleküler biyoloji tekniklerine akademik bir derinlikle ve uygulama yetkinliğiyle hakim olmak istiyorsanız bu fırsatı kaçırmayın.
👉 Eğitimi incelemek ve hemen kayıt olmak için buraya tıklayın: Nükleik Asit İzolasyonu ve PCR/Real Time-PCR Uygulamaları Eğitimi
